哈尔滨地区猪旋毛虫对猪,犬的感染性试验

用消化法所得的猪旋毛虫蚴分别接种猪，犬。结果表明，猪旋毛虫对猪，犬的感染性存在着明显差异，在猪的繁殖力指数为１１７．０４，而在犬为３０．６０，说明哈尔滨地区猪旋毛虫档地旋毛形线虫；     

旋毛虫肠道1期幼虫抗原性基因的筛选与分析

筛选旋毛虫肠道1期幼虫抗原性基因。利用λZAP载体构建旋毛虫肠道1期幼虫cDNA文库。用感染旋毛虫26 d猪血清对其进行免疫学筛选,对筛选出的阳性克隆进行测序与分析;应用RT-PCR方法对编码p46 000蛋白强阳性克隆基因在不同发育时期虫体转录情况进行检测。成功构建了旋毛虫肠道1期幼虫cDNA文库,其库容量为1.5×106pfu,重组率为95%,插入片段在400 bp~2 000 bp之间,扩增后文库滴度为1.5×1012pfu/mL。筛选出阳性克隆33个,序列分析表明,有20个克隆为同一已知基因,称为旋毛虫p46 000蛋白,编码旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂,且在筛选过程中反应信号均较强;还发现了一些旋毛虫新基因,如编码Ubc蛋白,GM13181蛋白,Rieske硫铁蛋白1等。本研究获得了一个高丰度、反应原性较强抗原基因,其编码蛋白为半胱氨酸蛋白酶抑制剂。     

几种旋毛虫抗原PAPS诊断液的效果比较试验

将几种旋毛虫抗原以同一浓度（0.6mg/mL）与PAPS微球交联,制成诊断试剂,进行旋毛虫阳性血清检测效果比较试验。结果显示,成虫、成虫ES、新生幼虫、肌幼虫B峰4川抗原均出现非特异性反应,而肌幼虫、肌幼虫ES、肌幼虫A峰抗原具有很高的敏感性,三者效价均达1:640。将此3种抗原所制得的诊断试剂对几种寄生虫阳性血清进行交叉试验,显示肌幼虫ES抗原对血吸虫、锥虫、弓形虫、肺吸虫、牛肝片吸虫、羊肝片吸虫阳性血清均不出现交叉反应,而肌幼虫A峰抗原、肌幼虫抗原对牛、羊肝片吸虫均出现交叉反应,对其他血清则不出现。表明肌幼虫ES抗原效果最佳,特异性最好,有很高的应用价值。     

旋毛虫感染兔血清抗体消长规律的研究

应用旋毛虫肌幼虫干燥冷浸可溶性抗原与聚醛化聚苯乙烯（ＰＡＰＳ）载体微球共价交联制成快诊试剂,对旋毛虫感染兔血清进行检测,初步探明其血清抗体的消长规律。实验显示,以１６０００条肌幼虫／只经口饲喂感染１０只兔,于第７天可检出抗体,并分别于感染后第４５￣４９天先后达到抗体最高水平,然后维持一段时间（２０￣３０天左右）,以后逐渐缓缓下降。此结果与旋毛虫肌幼虫感染宿主后的生活周期相吻合。肌幼虫在肠道内发育为     

旋毛虫S_3抗原的免疫学特性及其在诊断中的应用

利用放射免疫的方法,对旋毛虫S_3抗原的特异性与敏感性进行了研究,并对实际样品进行了测定.实验结果表明,S_3抗原可检测抗血清的最低滴度为5×10~(-5),与弓形虫、隐孢子虫及锥虫无交叉反应.与猪囊虫、肉孢子虫的交叉反应率分别为10%和5%.对实际阳性样品可全部检出,阴性样品假阳性率为2.5%,对实验大鼠在72h后可全部测出循环抗原.     

旋毛虫肌幼虫可溶性抗原、排泄分泌抗原的电泳分析

本文报道了应用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（ＩＥＦ）电泳及二维电泳（ＩＥＦ／ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对旋毛虫肌动虫排泄分泌（ＥＳ）抗原和肌幼虫可溶性抗原的分析结果。肌幼虫ＥＳ抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后用考马斯亮蓝染色蛋白质，结果显示１６条蛋白带，分子量范围２１～８０ＫＤ，其中主带９条。ＩＥＦ电泳后分别用ＰＡＳ染多糖、考马斯亮蓝Ｒ－２５０染蛋白质、Ｎｉｌｅ＇ｓ蓝染脂、醋酸ａ－萘酯／坚固蓝染酪酶同工酶，结果肌幼虫ＥＳ抗原分别显示１６，２６、７及０条带；肌幼虫可溶性抗原分别显示２１、３８、４及１１条带。二维电泳后用考马斯亮蓝Ｇ－２５０染色多肤斑点，结果ＥＳ抗原显示多肽斑点６１个；肌幼虫可溶抗原显示１２２个多肽斑点。     

抗旋毛虫单克隆抗体细胞林的建立及其特性鉴定

为筛选旋毛虫保护性抗原,建立了4株分泌抗旋毛虫McAb的细胞株。经连续培养30余代,仍稳定地分泌抗体。其中,2G3和2C10的靶抗原为旋毛虫幼虫表膜。免疫球蛋白 型及亚 鉴定表明,2G3和2C10为IgG_1,1D5为IgG_3,1C9为IgM。除2C10和IC9对伊氏锥虫可溶性抗原呈现阳性反应外,未见对猪圆线虫、猪囊尾蚴、伊氏锥虫表膜抗原和正常猪肉反应。经ELISA测定,2G3、2C10、1D5、1C9均可与施毛虫幼虫可溶性抗原作用,其腹水效价分别为1:50000、1:10000、1:1000、1:800。各McAb均与旋毛虫幼虫排泄分泌物抗原(ES抗原)作用,经ELISA测定表明,2G3腹水效价达1:320000。     

免疫微球凝集试验技术及其对猪旋毛虫病的快速诊断研究

本研究以旋毛虫可溶性抗原作诊断抗原,聚苯乙烯微球为抗原载体,通过碳化二亚胺反应把旋毛虫抗原共价偶联到聚苯乙烯载体微球上,制备了用于检测猪旋毛虫病血清抗体的免疫微球诊断试剂.从平板凝聚试验技术对117份实验感染旋毛虫病的猪、兔、大白鼠的血清抗体和疫区猪血清抗体进行了检测.试验结果,免疫微球凝集试验对实验感染旋毛虫病动物血清抗体检测的敏感性和特异性均为100%.在检测的敏感性上,免疫微球凝集试验比人工消化检查法高9.17%,比压片镜检法高25.26%.在阳性符合率上,与压片镜检相比为100%,与人工消化检查相比为97.25%.试验结果表明,免疫微球凝集试验技术对猪旋毛虫病是一简便、快速和可靠的诊断方法.     

The impact of Trichinella spiralis excretory-secretory products on dendritic cells

Parasitic nematode Trichinella spiralis exert immunomodulatory effect on the host immune response through excretory–secretory products (ES L1) released from the encysted muscle larvae. Rat bone-marrow derived dendritic cells (DCs) stimulated with ES L1 antigens acquire semi-matured status and induce Th2 and regulatory responses in vitro and in vivo. Priming naïve T cells in vitro with ES L1 pulsed DCs caused strong Th2 polarization, accompanied by elevated production of regulatory cytokines IL-10 and TGF-β and no increase in the proportion of CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ among the effector T cell population. In vivo T cell priming resulted in mixed Th1/Th2 cytokine response, with the dominance of the Th2 type and elevated levels of regulatory cytokines. Significant increase in the proportion of CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ cells was found among recipient's spleen cells. We have achieved to create immune status characteristic for the live infection by in vivo application of DCs educated with ES L1 antigens.     

P49重组抗原检测旋毛虫抗体的问接ELISA方法建立

以纯化的本地毛形线虫P49排泄分泌(ES)重组蛋白包被微量反应板,建立检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法,并确定了最适反应参数:抗原包被浓度4μg/mL;血清稀释度1:100,作用时间90 min;酶标二抗稀释度1:10 000,作用时间60min;最适封闭液为5 g/L聚乙烯醇(PVA);最适稀释液为含20 g/L PEG6000的PBS;底物最佳显色时间15 min.ELISA体系评价结果表明,该方法重复性好,灵敏度高,且可用于不同种株旋毛虫感染的P49血清抗体检测.